1939年11月16日，朱理治、陈少敏、李先念、任质斌在四望山东岳庙召开豫南、鄂中、鄂东党和军队负责人会议。由朱理治、陈少敏分别传达刘少奇关于统一边区党委和抗日部队以及创建根据地的指示。时豫南、鄂中党和武装已统一，但鄂东边区尚未完全统一。会议决定撤销鄂豫皖、鄂豫边、鄂中三个区党委，统一成立豫鄂边区党委，将三个地区党领导的抗日武装统一整编为新四军豫鄂挺进支队。会议结束时，刚到达苏皖敌后的刘少奇发来指示，“所有鄂中、鄂东党所领导的部队，统归你们指挥、节制，部队番号称‘新四军豫鄂挺进纵队’。”
1940年1月，中原局委员朱理治主持会议，宣布正式成立豫鄂边区党委。郑位三任书记（在皖东根据地染病未到任），陈少敏任副书记，代理书记。部队统一整编为新四军豫鄂挺进纵队，辖5个团队、3个总队，9000余人枪，李先念任司令员，任质斌任政委。成立军政委员会，为部队最高领导机关，由朱理治、李先念、任质斌、刘少卿（以上4人均在部队任职）、陈少敏五人组成。边区党委全面工作的重担落在陈少敏肩上。
豫鄂边区抗日根据地，孤悬敌后，处在几十万日、伪军和国民党军队包围中，不仅关系全边区1000多万人口的命运，还有近万名新四军战士和干部吃穿问题。会议结束，李先念、陈少敏到安陆县赵家棚，向部队宣布了建立边区党委和纵队的决定。
陈少敏同组织部长杨学诚研究了建党建政工作，同宣传部长夏忠武研究了宣传工作，同吴祖贻研究了民运和财政工作，主持召开边区第一次组织工作会议。
陈少敏接待了美国进步作家史沫特莱，陪她观看了边区人民选举乡政权的过程，向她介绍了“娃娃剧团”情况（主要由从竹沟南下途中收留的20多个孤儿组成），介绍了孩子们叫她陈妈妈的故事。陈少敏说，我女儿小梅夭折后，在我心里留下多么深的创伤呀！所以我一见到孩子，就把他们当小梅来看待。
1940年3月8日，陈少敏主持召开边区第一届妇女代表大会，成立边区救国总会，她兼总会长。随后又主持召开基层政权负责人和开明人士大会，成立边区宪政促进会。